1.標準品的稀釋?zhuān)埌凑照f(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

    2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個(gè)標準品和空白孔建議做復孔。每個(gè)樣品根據自己的數量來(lái)定，能使用復孔的盡量做復孔。

    3. 加樣：不規范的移液操作可能帶來(lái)誤差。

  （1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗NE抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；

  （2）標準品孔：加入標準品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；

  （3）待測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗NE抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。

    4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

    5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

    6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

    7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

    8. 測定：以空白孔調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后10分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

    9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來(lái)計算。