Sigma試劑：藥典重組胰蛋白酶,T5266-500MG,CAS: 9002-07-7

屬性：

生物來(lái)源：Porcine pancreas

質(zhì)量水平：200

無(wú)菌性：γ-irradiated

產(chǎn)品線(xiàn)：BioXtra

形式：lyophilized powder

specific activity：1,000-2,000 BAEE units/mg solid

分子量：23.8 kDa

濃度：25 mg/mL

應用：cell culture | mammalian: suitable

運輸：wet ice

儲存溫度：2-8°C

應用：

對于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶:肽的使用比例約為1:100至1:20。本品的典型用途是使貼壁細胞從培養表面脫落。 使細胞解離所需的胰蛋白酶濃度主要取決于細胞類(lèi)型和培養物代數。 Trypsins也被用于細胞培養過(guò)程中的細胞再懸浮，在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中用于蛋白質(zhì)的消化，以及在各種凝膠消化中。 其他的應用包括通過(guò)基于膜的技術(shù)評估結晶，以及在一項研究中確定蛋白質(zhì)折疊速率和產(chǎn)量可以被動(dòng)力學(xué)陷阱的存在所限制。

生化/生理作用：

胰蛋白酶可切割賴(lài)氨酸和精氨酸殘基的C末端肽段。 如果酸性殘基位于切割位點(diǎn)的任意一側，則該反應的水解速度減慢，并且如果脯氨酸殘基位于切割位點(diǎn)的羧基側，則水解停止。 胰蛋白酶活性的最佳pH條件為7-9。 胰蛋白酶還可以切割氨基酸合成衍生物的酯和酰胺鍵。 將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，用于中和鈣離子和鎂離子以防止其抑制胰蛋白酶活性。 去除這些離子會(huì )增加酶活性。

絲氨酸蛋白酶抑制劑（包括DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF和抑肽酶等）會(huì )抑制胰蛋白酶。

組分：

胰蛋白酶由 223 個(gè)氨基酸殘基的單鏈多肽組成，通過(guò)去除胰蛋白酶原的 N-末端六肽而產(chǎn)生，胰蛋白酶原在Lys-1le肽鍵處被切割。氨基酸序列由 6 個(gè)二硫鍵交聯(lián)。這是胰蛋白酶、β-胰蛋白酶的天然形式。β-胰蛋白酶可自水解，在賴(lài)氨酸殘基處裂解，生成 α-胰蛋白酶。胰蛋白酶是絲氨酸蛋白酶家族的一員。

注意：

1 mM HCl 溶液等分試樣可在-20°C 條件下穩定儲存 1 年。Ca 2 + 的存在也會(huì )減弱胰蛋白酶的自溶并維持其在溶液中的穩定性。胰蛋白酶在 2.0 M 尿素、2.0 M 鹽酸胍或 0.1% (w/v) SDS 中也將保留大部分活性。

單位定義：

一個(gè)BAEE單位以BAEE作為底物，在25°C、pH 7.6條件下每分鐘每毫升產(chǎn)生0.001的ΔA253 。一個(gè)BTEE單位=320個(gè)ATEE單位。反應體積=3.2mL（1cm的光徑）。

制備說(shuō)明

本品為凍干粉末，可以25 mg/mL的濃度溶于漢克的平衡鹽溶液。
對于涉及 EDTA 的應用，應使用不含 Ca 2 + 或 Mg 2 + 的緩沖鹽溶液溶解胰蛋白酶。

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