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免疫熒光染色原理及步驟

發(fā)布時(shí)間： 2022-12-01　　點(diǎn)擊次數： 1600次

免疫熒光染色原理及步驟

免疫熒光又稱(chēng)免疫熒光抗體。免疫熒光實(shí)驗原理是將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、特異性高，非特異性熒光染色少，相對使用標記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應進(jìn)行組織或細胞內抗原物質(zhì)的定位。

下面詳細介紹免疫熒光染色步驟：
1. 滴加 0.01mol/L，pH7.4 的PBS于待檢標本片上，10min后棄去，使標本保持一定濕度。
2. 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液，使其全部覆蓋標本，置于有蓋搪瓷盒內，保溫一定時(shí)間(參考：30min)。
3. 取出玻片，置玻片架上，先用 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 沖洗后，再按順序過(guò) 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 三缸浸泡，每缸 3-5 min，不時(shí)振蕩。
4. 取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5. 立即用熒光顯微鏡觀(guān)察。觀(guān)察標本的特異性熒光強度，一般可用“+"表示：(-)無(wú)熒光；(±)極弱的可疑熒光；(+)熒光較弱，但清楚可見(jiàn)；(++)熒光明亮；(+++--++++)熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++"以上，而各種對照顯示為(±)或(-)，即可判定為陽(yáng)性。

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